Bedankt voor uw bezoek aan nature.com. U gebruikt een browserversie met beperkte ondersteuning voor CSS. Voor de beste ervaring raden we u aan een meer up-to-date browser te gebruiken (of de compatibiliteitsmodus in Internet Explorer uit te schakelen). Om voortdurende ondersteuning te garanderen, geven we de site in de tussentijd weer zonder stijlen en JavaScript.

Nature volume 586, pagina's 594–599 (2020 )Citeer dit artikel

Een uitgeverscorrectie op dit artikel is gepubliceerd op 19 januari 2021

Dit artikel is bijgewerkt

Er is een effectief vaccin nodig om de verspreiding van de pandemie van het ernstige acute respiratoire syndroom coronavirus-2 (SARS-CoV-2) een halt toe te roepen. Onlangs hebben we veiligheids-, verdraagbaarheids- en antilichaamresponsgegevens gerapporteerd van een lopend placebogecontroleerd, waarnemer-geblindeerd fase I/II coronavirusziekte 2019 (COVID-19) vaccinonderzoek met BNT162b1, een met lipide nanodeeltjes geformuleerd nucleoside-gemodificeerd mRNA dat codeert voor de receptorbindend domein (RBD) van het SARS-CoV-2 spike-eiwit1. Hier presenteren we antilichaam- en T-celreacties na vaccinatie met BNT162b1 uit een tweede, niet-gerandomiseerde open-label fase I/II-studie bij gezonde volwassenen in de leeftijd van 18-55 jaar. Twee doses van 1-50 μg BNT162b1 wekten robuuste CD4+- en CD8+-T-celresponsen en sterke antilichaamresponsen op, met RBD-bindende IgG-concentraties duidelijk hoger dan die in serum van een cohort van individuen die hersteld waren van COVID-19. Geometrisch gemiddelde titers van SARS-CoV-2 serumneutraliserende antilichamen op dag 43 waren 0,7-voudig (1 μg dosis) tot 3,5-voudig (50 μg dosis) die van de teruggevonden individuen. Immuunsera neutraliseerden in grote lijnen pseudovirussen met verschillende SARS-CoV-2-spikevarianten. De meeste deelnemers hadden T-helper type 1 (TH1)-scheve T-cel-immuunreacties met RBD-specifieke CD8+ en CD4+ T-celexpansie. Interferon-γ werd geproduceerd door een grote fractie van RBD-specifieke CD8+ en CD4+ T-cellen. Het robuuste RBD-specifieke antilichaam, de T-cel en de gunstige cytokineresponsen die door het BNT162b1-mRNA-vaccin worden geïnduceerd, suggereren dat het het potentieel heeft om te beschermen tegen COVID-19 via meerdere gunstige mechanismen.

Ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2), dat in december 2019 in China werd vastgesteld, veroorzaakt coronavirusziekte 2019 (COVID-19) – een ernstig, acuut respiratoir syndroom met een complexe, zeer variabele ziektepathologie. Op 11 maart 2020 verklaarde de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO) de uitbraak van SARS-CoV-2 tot een pandemie. Op 16 september 2020 zijn er wereldwijd meer dan 29 miljoen gevallen gemeld, met meer dan 930.000 doden2. Het ernstige en wereldwijde effect van de pandemie op de menselijke samenleving vereist de snelle ontwikkeling van veilige en effectieve therapieën en vaccins3.

Lipide nanodeeltjes (LNP)-geformuleerde mRNA-vaccintechnologie maakt de levering van nauwkeurige genetische informatie samen met een adjuvans effect aan antigeenpresenterende cellen mogelijk. De profylactische effectiviteit van deze technologie tegen meerdere virale doelwitten is bewezen in preklinische modellen5,6,7. In klinische onderzoeken is aangetoond dat LNP- en liposoom-geformuleerde RNA-vaccins voor het voorkomen van infectieziekten of het behandelen van kanker veilig zijn en goed worden verdragen8. mRNA wordt tijdelijk tot expressie gebracht en integreert niet in het genoom. Het is moleculair goed gedefinieerd, vrij van materialen van dierlijke oorsprong en gesynthetiseerd door een efficiënt, celvrij in vitro transcriptieproces van DNA-templates5,9,10. De snelle en zeer schaalbare mRNA-productie en LNP-formuleringsprocessen maken een snelle productie van veel vaccindoses6,7,11 mogelijk, waardoor het geschikt is voor snelle vaccinontwikkeling en pandemische vaccinlevering.

Twee fase I/II overkoepelende proeven in Duitsland en de VS onderzoeken verschillende LNP-ingekapselde RNA-vaccinkandidaten die zijn ontwikkeld in 'Project Lightspeed', het gezamenlijke BioNTech-Pfizer COVID-19 RNA-vaccinontwikkelingsprogramma. Onlangs hebben we tussentijdse gegevens gerapporteerd die zijn verkregen in de VS-studie (NCT04368728) voor de meest geavanceerde kandidaat, BNT162b11. BNT162b1 codeert voor het receptorbindende domein (RBD) van het SARS-CoV-2 spike-eiwit, een belangrijk doelwit van neutraliserende antilichamen. Het RBD-antigeen dat tot expressie wordt gebracht door BNT162b1 wordt gefuseerd aan een van T4 fibritine afgeleid 'foldon'-trimerisatiedomein om de immunogeniciteit ervan te verhogen door multivalente weergave12. Het RNA is geoptimaliseerd voor hoge stabiliteit en translatie-efficiëntie , en bevat 1-methylpseudouridine in plaats van uridine om aangeboren immuundetectie te dempen en om mRNA-translatie in vivo te verhogen . In de placebogecontroleerde, voor waarnemers geblindeerde VS-studie werden doseringen van 10 g, 30 g (prime- en boost-doses met een tussenpoos van 21 dagen voor beide dosisniveaus) en 100 g (alleen prime-doses) toegediend. Er werden geen ernstige bijwerkingen gemeld. Lokale reacties op de injectieplaats en systemische voorvallen (meestal griepachtige symptomen) waren dosisafhankelijk, over het algemeen licht tot matig en van voorbijgaande aard. RBD-bindende immunoglobuline G (IgG)-concentraties en SARS-CoV-2-neutraliserende titers in sera namen toe met het dosisniveau en na de tweede dosis. Veertien dagen na de boostdosis bereikten de geometrisch gemiddelde neutraliserende titers 1,9 tot 4,6 keer die welke werden gezien in een panel van COVID-19 humane herstellende sera (HCS).

Deze studie is nu een aanvulling op en een uitbreiding van ons vorige rapport met beschikbare gegevens van de Duitse proef (NCT04380701, EudraCT: 2020-001038-36), en biedt een gedetailleerde karakterisering van antilichaam- en T-cel-immuunresponsen die worden opgewekt door vaccinatie met BNT162b1.

Tussen 23 april 2020 en 22 mei 2020 zijn in Duitsland 60 deelnemers ingeënt met BNT162b1. Twaalf deelnemers voor elk van de dosisniveaugroepen (1 g, 10 g, 30 g en 50 g) kregen de eerste dosis op dag 1 en een boosterdosis op dag 22 (behalve één persoon in elk van de 10- en 50 g). -μg cohorten op dosisniveau die deelnamen om redenen die geen verband hielden met het onderzoeksgeneesmiddel), en 12 deelnemers kregen alleen op dag 1 een primaire dosis van 60 μg (Extended Data Fig. 1). De onderzoekspopulatie bestond uit gezonde mannen en niet-zwangere vrouwen met een gemiddelde leeftijd van 37 jaar (bereik 20-56 jaar) met een gelijke geslachtsverdeling. De meeste deelnemers waren blank (96,7%) met één Afro-Amerikaanse en één Aziatische deelnemer (elk 1,7%; Uitgebreide gegevenstabel 1). Voorlopige data-analyse gericht op immunogeniciteit (Extended Data Table 2).

In het kort, er waren geen ernstige bijwerkingen en geen opnames vanwege gerelateerde bijwerkingen voor welke dosis dan ook. Net als bij de Amerikaanse studie waren de meeste gerapporteerde systemische gebeurtenissen in de groepen van 10 g en 30 g te wijten aan reactogeniciteit, met een typisch begin binnen de eerste 24 uur van immunisatie (Extended Data Fig. 2). Reacties op de injectieplaats binnen 7 dagen na de eerste of boost-doses hadden voornamelijk betrekking op pijn en gevoeligheid. De reactogeniciteit was dosisafhankelijk en was meer uitgesproken na de boostdosis. De bijbehorende symptomatologie, zoals koorts, koude rillingen, hoofdpijn, spierpijn, gewrichtspijn, pijn op de injectieplaats en gevoeligheid, was meestal licht of matig, met af en toe ernstige (graad 3) manifestaties. In het dosisniveau-cohort van 30 g ondervonden 2 van de 12 (16,7%) proefpersonen ernstige lokale reactogeniciteit; 6 van de 12 (50%) proefpersonen meldden ernstige systemische reactogeniciteit (voornamelijk hoofdpijn, koude rillingen, vermoeidheid of spierpijn); en 1 op de 12 proefpersonen (8,3%) meldde koorts. Deze bijwerkingen waren van voorbijgaande aard, verdwenen spontaan of waren beheersbaar met eenvoudige maatregelen (bijvoorbeeld paracetamol). Vanwege de reactogeniciteit die werd gemeld na de boostdosis van 50 g, kregen deelnemers die een initiële dosis van 60 g hadden gekregen geen boost-injectie.

Hoewel er geen relevante veranderingen waren in routinematige klinische laboratoriumwaarden na vaccinatie met BNT162b1, vertoonden gevaccineerde deelnemers een voorbijgaande toename van C-reactief proteïne (CRP) en een tijdelijke verlaging van het aantal lymfocyten in het bloed, die beide dosisafhankelijk waren (Extended Gegevens Afb. 3). CRP is een inflammatoir serumeiwit dat eerder is beschreven als biomarker voor verschillende infectieziektevaccins en een indicator van de activiteit van vaccinadjuvans16,17,18,19. Onze eerdere klinische ervaring met RNA-vaccins suggereert dat de voorbijgaande afname van lymfocyten waarschijnlijk te wijten is aan aangeboren immuunstimulatie-gerelateerde herverdeling van lymfocyten in lymfoïde weefsels . Gelijktijdige neutropenie werd niet waargenomen. Zowel de CRP-spiegels als het aantal lymfocyten worden beschouwd als farmacodynamische markers voor het werkingsmechanisme van RNA-vaccins.

Concentraties van RBD-bindende IgG- en SARS-CoV-2-neutraliserende titers werden beoordeeld bij baseline, 7 en 21 dagen na de BNT162b1-primingdosis (dag 8 en 22), en 7 en 21 dagen na de boostdosis (dag 29 en 43). ), behalve het cohort van 60 g, dat alleen een priming-dosis ontving (Fig. 1, Uitgebreide gegevenstabel 3).

Vaccinatieschema en serumbemonstering worden beschreven in Uitgebreide gegevens. 1. De deelnemers werden geïmmuniseerd met BNT162b1 op dag 1 (alle dosisniveaus) en 22 (alle dosisniveaus behalve 60 g) (n = 12 per groep; vanaf dag 22 n = 11 voor de 10 μg en 50 μg cohorten). Pre-dosisresponsen over alle dosisniveaus werden gecombineerd. COVID-19-herstelmonsters (HCS, n = 38) werden verkregen ten minste 14 dagen na PCR-bevestigde diagnose en op een moment dat de donoren niet langer symptomatisch waren. Elk serum werd in duplo getest en GMC uitgezet. Voor waarden onder de ondergrens van kwantificering (LLOQ) = 1,15 werden LLOQ/2-waarden uitgezet. Pijlpunten geven de vaccinatiedagen aan. Aangevinkte balken geven aan dat er geen boostvaccinatie is uitgevoerd. Gegevens weergegeven als groep GMC (waarden boven balken) met 95% betrouwbaarheidsinterval (BI).

Geïmmuniseerde deelnemers vertoonden een sterke, dosisafhankelijke vaccin-geïnduceerde antilichaamrespons. Eenentwintig dagen na de priming-dosis (voor de vier dosisniveaus variërend van 1 tot 50 g) waren de geometrisch gemiddelde concentraties (GMC's) van RBD-bindend IgG op een dosisafhankelijke manier gestegen, met GMC's variërend van 265 tot 1.672 eenheden (U) ml-1 (Fig. 1). Zeven dagen na de boostdosis (dag 29), vertoonden RBD-bindende IgG GMC's bij deelnemers die waren gevaccineerd met 1-50 g BNT162b1 een sterke, dosisafhankelijke boosterrespons variërend van 2.015 tot 25.006 U ml-1. Op dag 43 (21 dagen na boost) lagen de GMC's van RBD-bindende antilichaam in het bereik van 3.920-18.289 E ml-1 bij BNT162b1-gevaccineerde personen, vergeleken met een GMC van 602 E ml-1 gemeten in een panel van herstellende sera van 38 patiënten die waren geïnfecteerd met SARS-CoV-2. De patiënten waren 18-83 jaar oud en sera werden genomen ten minste 14 dagen na de diagnose bevestigd door polymerasekettingreactie (PCR). In het cohort op dosisniveau van 60 g, dat alleen een priming-dosis kreeg, was de RBD-bindende IgG GMC 755 E ml-1 op dag 43, wat aangeeft dat een boostdosis nodig is om de antilichaamconcentraties te verhogen.

Geometrisch gemiddelde titers (GMT's) van SARS-CoV-2-neutraliserende antilichamen namen op een dosisafhankelijke manier bescheiden toe 21 dagen na de priming-dosis (Fig. 2a, Uitgebreide gegevenstabel 4). Aanzienlijk hogere serumneutraliserende GMT's werden 7 dagen na de boosterdosis bereikt, tot 36 (1 g dosisniveau), 158 (10 g dosisniveau), 308 (30 μg dosisniveau) en 578 (50 g dosisniveau), vergeleken met tot 94 voor het herstellende serumpanel. Op dag 43 (21 dagen na de boost) namen de neutraliserende GMT's en RBD-bindende GMC's af (met uitzondering van de dosisgroep van 1 g). Serumvirus-neutraliserende GMT's waren sterk gecorreleerd met RBD-bindende IgG GMC's (Fig. 2b), en het vaccin veroorzaakte lagere verhoudingen van serum-neutraliserende GMT tot RBD-bindende IgG GMC dan infectie met SARS-CoV-2. Samengevat, de antilichaamreacties die door BNT162b1 in onderzoek BNT162-01 werden opgewekt, kwamen grotendeels overeen met die waargenomen in het Amerikaanse onderzoek1.

Vaccinatieschema en serumbemonstering worden beschreven in Uitgebreide gegevens. 1 en deelnemers werden geïmmuniseerd zoals in Fig. 1. a, SARS-CoV-2 50% neutralisatietiters (VNT50) bij geïmmuniseerde deelnemers en patiënten die hersteld waren van COVID-19 (HCS). Elk serum werd in duplo getest en GMT uitgezet. Voor waarden onder de LLOQ = 20 werden LLOQ/2-waarden uitgezet. Pijlpunten geven de vaccinatiedagen aan. Aangevinkte balken geven aan dat er geen boostvaccinatie is uitgevoerd. Gegevens weergegeven als groeps-GMT's (waarden boven balken) met 95% CI. b, niet-parametrische Spearman-correlatie van recombinante RBD-bindende IgG GMC's (zoals in Fig. 1) met VNT50 uit sera verzameld op dag 29. c, Pseudovirus 50% neutralisatietiters (pVNT50) over een pseudoviruspanel met 17 SARS-CoV-2-pieken eiwitvarianten waaronder 16 RBD-mutanten en de dominante spike-eiwitvariant D614G (dosisniveau 10 g, n = 1; dosisniveaus 30 en 50 g, n = 2 representatieve sera van dag 29). Elk serum werd in duplo getest en GMT uitgezet. LLOQ = 40. Gegevens weergegeven als groep GMT met 95% BI.

Om de reikwijdte van de neutraliserende respons aan te tonen, hebben we sera van gevaccineerde deelnemers getest tegen een panel van 16 SARS-CoV-2 RBD-varianten die zijn geïdentificeerd via openbaar beschikbare informatie21 en de dominante (niet-RBD) spike-variant D614G22 in pseudovirion-neutralisatie-assays. Sera die 7 dagen na de tweede dosis BNT162b1 waren verzameld, vertoonden hoge neutraliserende titers voor elk van de SARS-CoV-2-spikevarianten (Fig. 2c, Uitgebreide gegevenstabel 5).

CD4+- en CD8+-T-celresponsen bij personen die waren geïmmuniseerd met BNT162b1 werden gekarakteriseerd vóór de priming-vaccinatie (dag 1) en op dag 29 (7 dagen na de boostvaccinatie voor de cohorten van 1-50 g) met behulp van directe ex vivo IFNγ-enzymgebonden immunosorbentspot (ELISpot) -assay met perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) van 51 deelnemers over de cohorten op dosisniveau van 1 g tot 60 g (Fig. 3). In deze test werden CD4+- of CD8+-T-celeffectoren 's nachts gestimuleerd met overlappende peptiden die de volledige sequentie van de door het vaccin gecodeerde RBD vertegenwoordigen.

Het vaccinatieschema is beschreven in Uitgebreide gegevens Fig. 1. PBMC's verkregen op dag 1 (pre-prime) en op dag 29 (7 dagen na boost voor cohorten 1 en 10 g, n = 11 elk; 30 en 50 μg, n = 10 elk; 28 dagen na prime voor het 60 g-cohort, n = 9) werden verrijkt voor CD4+- of CD8+ T-celeffectoren en afzonderlijk gedurende de nacht gestimuleerd met een overlappende peptidepool die de door het vaccin gecodeerde RBD vertegenwoordigt voor beoordeling in directe ex vivo IFNγ ELISpot. Gemeenschappelijke pathogene T-celepitooppools CEF (CMV, EBV, influenzavirus HLA klasse I-epitopen) en CEFT (CMV, EBV, influenzavirus, tetanustoxoïde HLA klasse II-epitopen) dienden om de algemene T-celreactiviteit te beoordelen en celkweekmedium diende als negatief controle. Elk gegevenspunt vertegenwoordigt het genormaliseerde gemiddelde aantal vlekjes van dubbele putjes voor één studiedeelnemer, na aftrekking van de controle met alleen medium (a, c). a, RBD-specifieke CD4+- en CD8+ T-celreacties voor elk dosiscohort. Verhoudingen boven gegevenspunten na vaccinatie zijn het aantal deelnemers met een detecteerbare CD4+- of CD8+ T-celrespons van het totale aantal geteste deelnemers per dosiscohort. b, Voorbeeldige CD4 + en CD8 + ELISpot-afbeeldingen voor een cohortdeelnemer van 10 μg. c, RBD-specifieke CD4+ en CD8+ T-cel-responsen bij alle deelnemers die prime- en boostvaccinatie kregen (n = 42) met een positieve respons op RBD en hun baseline CEFT- en CEF-specifieke T-celresponsen. Horizontale balken geven de mediaan aan.

Van de 42 deelnemers die prime-boost-vaccinatie hadden gekregen (de cohorten van 1 g tot 50 g), vertoonden 40 (95,2%, inclusief alle deelnemers die werden behandeld met 10 μg BNT162b1 of meer) RBD-specifieke CD4+ T-celreacties. Hoewel de omvang van de respons varieerde tussen individuen, hadden deelnemers met de sterkste CD4+ T-celresponsen op RBD meer dan tien keer de geheugenresponsen die werden waargenomen bij dezelfde deelnemers wanneer ze werden gestimuleerd met cytomegalovirus (CMV), Epstein Barr-virus (EBV), influenzavirus en van tetanustoxoïd afgeleide immunodominante peptidepanelen (Fig. 3a-c). In het 60 g-cohort, dat alleen met de priming-dosis was behandeld, waren zowel het immunogeniciteitspercentage (5/9; 55,6%) als de responssterkte lager dan bij de andere cohorten, wat het belang van boostervaccinatie aangeeft. Er waren geen CD4+ T-celresponsen detecteerbaar bij baseline, behalve één deelnemer in het 50 μg dosiscohort met een laag aantal reeds bestaande RBD-reactieve CD4+ T-cellen, die aanzienlijk toenamen na vaccinatie (genormaliseerd gemiddeld aantal vlekken van 63 tot 1.519) . Voor twee deelnemers uit het 1 μg-cohort konden de baselinegegevens niet worden geëvalueerd. De sterkte van RBD-specifieke CD4+ T-celreacties correleerde positief met zowel RBD-bindende IgG als SARS-CoV-2-neutraliserende antilichaamtiters (Extended Data Fig. 4a, b), consistent met het concept van intramoleculaire hulp . De twee deelnemers die waren geïmmuniseerd met 1 µg BNT162b1 en die geen CD4+-respons hadden, hadden geen detecteerbare virusneutraliserende titers (VNT50) (Extended Data Fig. 4b).

Van de deelnemers die enige door vaccin geïnduceerde CD8+ T-celrespons vertoonden (32/42 deelnemers die de prime-boost-dosering ontvingen, 76,2%), vertoonde de meerderheid sterke responsen (Fig. 3a) die vergelijkbaar waren met geheugenresponsen tegen CMV, EBV en influenza virus bij dezelfde deelnemers (Fig. 3b, c). Personen die waren geïmmuniseerd met een enkele dosis van 60 g hadden een lager responspercentage (4/9; 44%) en een zwakkere CD8+ T-celrespons op RBD. De sterkte van RBD-specifieke CD8+ T-celreacties correleerde positief met vaccin-geïnduceerde CD4+ T-celreacties, maar correleerde niet significant met SARS-CoV-2 neutraliserende antilichaamtiters (Extended Data Fig. 4c, d).

Merk op dat, hoewel bij 1 μg BNT162b1 de CD4+- en CD8+-T-celrespons lager waren dan bij de andere doses (respectievelijk 9 en 8 van de 11 deelnemers), het aantal vaccin-geïnduceerde T-cellen bij sommige deelnemers bijna even hoog was als hoog als bij 50 µg BNT162b1 (Fig. 3a).

Om de functionaliteit en polarisatie van RBD-specifieke T-cellen te beoordelen, identificeerden we cytokinen die worden uitgescheiden als reactie op stimulatie met overlappende peptiden die de volledige sequentie van de door het vaccin gecodeerde RBD vertegenwoordigen door intracellulaire kleuring (ICS) voor IFNγ, IL-2 en IL -4 in PBMC's verzameld voor en na vaccinatie van 52 deelnemers die waren geïmmuniseerd met BNT162b1. RBD-specifieke CD4+ T-cellen scheidden IFNγ, IL-2 of beide af, maar bij de meeste individuen scheidden ze geen IL-4 af (Fig. 4 a-c, Uitgebreide gegevenstabel 6). Evenzo scheidden fracties van RBD-specifieke CD8+ T-cellen IFNγ+ en IL-2 uit.

Het vaccinatieschema wordt beschreven in Uitgebreide gegevens Fig. 1. PBMC's van gevaccineerde deelnemers (7 dagen na boost voor cohorten 1 en 10 g, n = 10 elk; 30 g, n = 12; 50 g, n = 9; 28 dagen na prime voor het 60 g-cohort, n = 11) en donoren die hersteld waren van COVID-19 (HCS, n = 15; c) werden 's nachts gestimuleerd met een overlappende peptidepool die de door het vaccin gecodeerde RBD vertegenwoordigde en geanalyseerd met flowcytometrie ( a-c) en op kralen gebaseerde immunoassay (d). De poortstrategie is weergegeven in aanvullende figuur 1. a, Voorbeeldige pseudokleurstroomcytometriegrafieken van cytokine-producerende CD4 + en CD8 + T-cellen van een deelnemer die was geïmmuniseerd met de dosis van 10 μg. b, RBD-specifieke CD4+ T-cellen die het aangegeven cytokine produceren als een percentage van de totale cytokine-producerende RBD-specifieke CD4+ T-cellen. Rekenkundig gemiddelde met 95% BI. CD4-non-responders (<0,03% totale cytokine-producerende T-cellen; 1 µg, n = 5; 10 µg, n = 1; 30 µg, n = 2; 50 µg, n = 1; 60 µg, n = 6) werden uitgesloten. c, RBD-specifieke CD8+ (boven) of CD4+ (onder) T-cellen die het aangegeven cytokine produceren als een percentage van de totale circulerende T-cellen van dezelfde subset. Waarden boven gegevenspunten geven gemiddelde fracties per dosiscohort aan. De PBMC's van de deelnemers werden getest als een enkele instantie (b, c). d, Cytokine-afgifte door PBMC's van het 50 µg-cohort (n = 5; testresultaten van resterende monsters van dit en andere cohorten die op dat moment niet beschikbaar waren). Elk gegevenspunt vertegenwoordigt het gemiddelde van dubbele putjes afgetrokken door de DMSO-controle voor één studiedeelnemer. LLOQ's waren 6,3 pg ml−1 voor TNF, 2,5 pg ml−1 voor IL-1β, 7,6 pg ml−1 voor IL-12p70, 11,4 pg ml−1 voor IL-4 en 5,3 pg ml−1 voor IL-5.

De gemiddelde fractie van RBD-specifieke T-cellen in totaal circulerende T-cellen verkregen door BNT162b1-vaccinatie was aanzienlijk hoger dan die waargenomen bij vijftien donoren die hersteld waren van COVID-19. Fracties van RBD-specifieke IFNγ+ CD8+ T-cellen bereikten tot enkele procenten van de totale CD8+ T-cellen in perifeer bloed bij geïmmuniseerde individuen (Fig. 4c). De supernatanten van PBMC's van vijf gevaccineerde deelnemers werden ex vivo gestimuleerd met overlappende RBD-peptiden en produceerden de pro-inflammatoire cytokinen TNF, IL-1β en IL-12p70, maar noch IL-4 noch IL-5 (Fig. 4d).

Samenvattend geven deze bevindingen aan dat BNT162b1 bij bijna alle deelnemers functionele en pro-inflammatoire CD4+- en CD8+-T-celreacties induceert, met TH1-polarisatie van de helperreactie.

We observeerden gelijktijdige productie van neutraliserende antilichamen, activering van virusspecifieke CD4+- en CD8+-T-cellen en robuuste afgifte van immuunmodulerende cytokinen zoals IFNγ, wat een gecoördineerde immuunrespons vertegenwoordigt om een ​​virale inbraak tegen te gaan . IFNγ is een sleutelcytokine voor verschillende antivirale reacties. Het werkt in synergie met type I interferonen om de replicatie van SARS-CoV25 te remmen. Personen met polymorfismen in het IFNG-gen die de IFNγ-activiteit verminderen, hebben een vijfvoudige toename in gevoeligheid voor SARS26. De robuuste uitlokking van IFNγ-producerende CD8+ T-cellen geeft aan dat een gunstige cellulaire immuunrespons met antivirale en immuunversterkende eigenschappen een aanvulling vormt op de sterke neutraliserende antilichaamrespons.

De detectie van IFNγ, IL-2 en IL-12p70, maar niet IL-4 of IL-5, wijst op een gunstig TH1-profiel en de afwezigheid van een mogelijk schadelijke TH2-immuunrespons. CD4+- en CD8+-T-cellen kunnen een langdurig immuungeheugen tegen coronavirussen verlenen, zoals aangegeven bij SARS-CoV-1-overlevenden, bij wie CD8+-T-cellen 6-11 jaar aanhielden24,27. Sommige gevallen van asymptomatische virusblootstelling zijn in verband gebracht met een cellulaire immuunrespons zonder seroconversie, wat erop wijst dat SARS-CoV-2-specifieke T-cellen relevant kunnen zijn bij ziektebestrijding, zelfs bij afwezigheid van neutraliserende antilichamen28. In onze studie hebben bijna alle gevaccineerde vrijwilligers RBD-specifieke T-celreacties opgezet die werden gedetecteerd met behulp van een ex vivo ELISpot-assay, die werd uitgevoerd zonder voorafgaande expansie van T-cellen en die alleen T-celreacties van hoge omvang vastlegt. Hoewel de sterkte van de T-celresponsen aanzienlijk varieerde tussen deelnemers, zagen we geen duidelijke dosisafhankelijkheid van de T-celresponssterkte binnen het geteste dosisbereik (1-50 g). Zelfs met een dosis van slechts 1 g werd bij de meeste proefpersonen door mRNA gecodeerde immunogeenstimulatie en robuuste expansie van T-cellen bereikt.

Onze resultaten bevestigen de dosisafhankelijkheid van RBD-bindende IgG- en neutralisatiereacties en reproduceren onze eerdere bevindingen voor de 10 en 30 g dosisniveaus van BNT162b1 in de VS-studie1. De waargenomen sterke boostrespons voor BNT162b1 komt overeen met de afwezigheid van een beperkende anti-vectorimmuniteit, wat een kenmerkend voordeel is van het op RNA gebaseerde vaccinplatform.

De verhouding van serumvirusneutralisatie GMT tot recombinant RBD-bindend IgG GMC is lager na immunisatie met BNT162b1 dan na infectie met SARS-CoV-2. Zoals eerder opgemerkt, kan dit verschil gedeeltelijk worden toegeschreven aan BNT162b1 die antilichamen opwekt die epitopen binden die worden blootgesteld aan het RNA-gecodeerde RBD-immunogeen maar begraven en ontoegankelijk in de pieken van SARS-CoV-2-virions, waardoor RBD-binding differentieel toeneemt IgG GMC's na immunisatie. Bovendien kan infectie met SARS-CoV-2 neutraliserende antilichamen opwekken die epitopen herkennen die zijn blootgesteld aan virionen en zich buiten het RBD bevinden, waardoor de serumneutraliserende GMT na infectie differentieel wordt verhoogd29,30.

Zoals gerapporteerd voor andere soorten vaccins, pieken de mRNA-vaccin-geïnduceerde B-celresponsen doorgaans twee weken na de boost en nemen daarna in de loop van de tijd af totdat ze een aanhoudende geheugenfase bereiken met slechts een geleidelijke afname31. De RBD-bindende antilichaamconcentraties en SARS-COV-2-neutraliserende titers die worden opgewekt door twee doses BNT162b1 lijken dit patroon te volgen, met een afname op dag 43. Een langetermijntrend op basis van de contractiefase kan niet worden geëxtrapoleerd. Een beschrijving van de duurzaamheid van de antilichaamrespons op BNT162b1 zal verschijnen gedurende de geplande zes maanden serologische follow-up in deze studie en twee jaar follow-up in de overeenkomstige Amerikaanse studie. Een onderscheidende observatie voor deze op RNA gebaseerde vaccinkandidaat is dat twee injecties met BNT162b1 bij een dosis van slechts 1 g niveaus van RBD-bindend IgG kunnen induceren die hoger zijn dan die waargenomen in herstellende sera, en serumneutraliserende antilichaamtiters die nog steeds toenemen tot dag 43.

Zoals ook werd waargenomen in de Amerikaanse studie van dit kandidaat-vaccin1, is de reactogeniciteit voor BNT162b1 dosisafhankelijk, en een groter deel van de deelnemers had ernstige reactogeniciteit na de tweede dosis, wat leidde tot de beslissing om geen booster toe te dienen bij de dosis van 60 μg peil. Het aantal proefpersonen dat ernstige bijwerkingen rapporteerde was meer uitgesproken in de Duitse studie dan in de placebogecontroleerde Amerikaanse studie. BNT162b1 toonde in principe een beheersbare verdraagbaarheid aan bij dosisniveaus die robuuste immuunresponsen opriepen. Ondertussen is BNT162b2, dat is afgeleid van hetzelfde nucleoside-gemodificeerde vaccinplatform maar codeert voor het volledige spike-eiwit, beoordeeld in twee klinische onderzoeken en bleek het een milder reactogeniciteitsprofiel te hebben32. Op basis van de gunstigere systemische verdraagbaarheid werd BNT162b2 geselecteerd om door te gaan naar een fase II/III-studie.

Puur RBD-gerichte immuniteit kan worden beschouwd als vatbaar voor ontsnapping van het virus door enkele aminozuurveranderingen in dit kleine domein. Om dit probleem aan te pakken, hebben we neutralisatietests uitgevoerd met 17 pseudo-getypeerde virussen, waarvan 16 cellen binnendringen met behulp van een piek met een andere RBD-variant die wordt aangetroffen in circulerende stammen en waarvan één de dominante piekvariant D614G gebruikt. Alle 17 varianten werden efficiënt geneutraliseerd door de vijf geteste BNT162b1 immuunsera. Op dit moment is er waarschijnlijk onvoldoende immuniteit tegen SARS-CoV-2 in de menselijke populatie om antigene drift te stimuleren. Als in de toekomst ontsnapping uit door RBD opgewekte immuniteit zou ontstaan, zou de veelzijdigheid van het RNA-platform een ​​snelle aanpassing aan nieuw opkomende virale stammen kunnen vergemakkelijken.

Beperkingen van onze klinische studie omvatten de kleine steekproefomvang en de beperking tot deelnemers jonger dan 55 jaar. Een andere beperking is dat we geen verdere T-celanalyse hebben uitgevoerd (bijvoorbeeld deconvolutie van epitoopdiversiteit, karakterisering van HLA-restrictie, T-celfenotypering en TCR-repertoireanalyse) voor en na vaccinatie, vanwege de beperkte bloedvolumes die beschikbaar waren voor biomarker analyse. Evenzo hebben we de inductie van weefsel-resident geheugen CD8+ T-cellen niet beoordeeld. Verder is het belangrijk om de persistentie van potentieel beschermende immuunresponsen te bestuderen, aangezien vaccingeïnduceerde immuniteit in de loop van de tijd kan afnemen. Monsters om de persistentie te beoordelen zijn nog niet beschikbaar, maar zijn gepland in het onderzoeksprotocol en zullen elders worden gerapporteerd. De hier gerapporteerde resultaten werden verkregen door immunisatie met een van de vier vaccinkandidaten in het onderzoek. Aankomende rapporten van Project Lightspeed zullen de gegevens presenteren die zijn verkregen voor andere COVID-19-vaccinkandidaten, waaronder BNT162b2, de op RNA gebaseerde vaccinkandidaat die codeert voor het volledige SARS-CoV-2 spike-glycoproteïne en wordt getest in een fase III-werkzaamheidsonderzoek32 .

Studie BNT162-01 (NCT04380701) is een lopend, first-in-human, fase I/II, open-label dosisbereik klinisch onderzoek om de veiligheid, verdraagbaarheid en immunogeniciteit van oplopende dosisniveaus van verschillende intramusculair toegediende BNT162-mRNA-vaccins te beoordelen kandidaten bij gezonde mannen en niet-zwangere vrouwen van 18 tot 55 jaar (gewijzigd om 56-85 jaar toe te voegen). De belangrijkste uitsluitingscriteria waren onder meer eerdere klinische of microbiologische diagnose van COVID-19; ontvangst van medicijnen om COVID-19 te voorkomen; eerdere vaccinatie met een coronavirusvaccin; een positieve serologische test voor SARS-CoV-2 IgM en/of IgG; en een SARS-CoV-2 NAAT-positief neusuitstrijkje; mensen met een verhoogd risico op ernstige COVID-19; en immuungecompromitteerde personen. De primaire eindpunten van het onderzoek zijn veiligheid en immunogeniciteit.

In het hier gerapporteerde deel van de studie werden vijf dosisniveaus (1 μg, 10 g, 30 μg, 50 g of 60 g) van de BNT162b1-kandidaat beoordeeld op één locatie in Duitsland met 12 gezonde deelnemers per dosisniveau in een dosis- escalatie/de-escalatie ontwerp. Sentinel-dosering werd uitgevoerd in elk dosis-escalatiecohort. Vooruitgang in dat cohort en dosisescalatie vereisten gegevensbeoordeling door een veiligheidsbeoordelingscommissie. De deelnemers kregen op dag 1 een prime-dosis BNT162b1 en op dag 22 ± 2 een boostdosis. Serum voor antilichaamtesten werd verkregen op dag 1 (pre-prime), 8 ± 1 (post-prime), 22 ± 2 (pre-prime), boost), 29 ± 3 en 43 ± 4 (post-boost). PBMC's voor T-celonderzoeken werden verkregen op dag 1 (pre-prime) en 29 ± 3 (post-boost). De verdraagbaarheid werd beoordeeld aan de hand van het dagboek van de patiënt. Eén persoon in het 10 g-cohort en één in het 50 g-cohort verlieten het onderzoek voordat de immunisatie werd verhoogd vanwege het intrekken van de toestemming om privéredenen.

De gepresenteerde gegevens omvatten alleen de BNT162b1-geïmmuniseerde cohorten en zijn gebaseerd op een voorlopige analyse met een data-extractiedatum van 23 juli 2020, gericht op analyse van door vaccin geïnduceerde immunogeniciteit (secundair eindpunt) die beschrijvend is samengevat op de verschillende tijdstippen en op reactogeniciteit. Alle deelnemers van wie gegevens beschikbaar waren, werden opgenomen in de immunogeniciteitsanalyses.

De proef werd uitgevoerd in Duitsland in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki en de richtlijnen voor goede klinische praktijken en met goedkeuring door een onafhankelijke ethische commissie (Ethik-Kommission van de Landesärztekammer Baden-Württemberg, Stuttgart, Duitsland) en de bevoegde regelgevende instantie (Paul- Ehrlich Instituut, Langen, Duitsland). Alle deelnemers hebben schriftelijke geïnformeerde toestemming gegeven.

BNT162b1 bevat een Good Manufacturing Practice (GMP)-kwaliteit mRNA-medicijnstof die codeert voor het getrimeriseerde SARS-CoV-2 spike-glycoproteïne RBD-antigeen. Het RNA wordt gegenereerd uit een DNA-matrijs door in vitro transcriptie in aanwezigheid van 1-methylpseudouridine-5′-trifosfaat (m1ΨTP; Thermo Fisher Scientific) in plaats van uridine-5′-trifosfaat (UTP). Capping wordt co-transcriptioneel uitgevoerd met behulp van een trinucleotide cap 1 analoog ((m27.3′-O)Gppp(m2′-O)ApG; TriLink). Het voor antigeen coderende RNA bevat sequentie-elementen die de RNA-stabiliteit en translatie-efficiëntie in menselijke dendritische cellen verhogen13,14. Het mRNA is geformuleerd met lipiden om het RNA-LNP-geneesmiddelproduct te verkrijgen. Het vaccin werd getransporteerd en geleverd als een gebufferde vloeibare oplossing voor intramusculaire injectie en werd bewaard bij -80 ° C.

Een pool van 15-meer-peptiden die elkaar overlapten met 11 aminozuren en de hele sequentie van de door BNT162b1 gecodeerde SARS-CoV-2 RBD bedekten, werd gebruikt voor ex vivo stimulatie van PBMC's voor flowcytometrie, IFNγ ELISpot en cytokineprofilering. CEF (CMV, EBV, influenzavirus; humaan leukocytenantigeen (HLA) klasse I-epitooppeptidepool) en CEFT (CMV, EBV, influenzavirus, tetanustoxoïde; HLA klasse II-epitooppeptidepool) (beide JPT Peptide Technologies) werden gebruikt als controles voor algemene T-celreactiviteit.

Menselijke SARS-CoV-2-infectie/COVID-19 herstellende sera (n = 38) werden afgenomen van donoren van 18-83 jaar oud, ten minste 14 dagen na de door PCR-bevestigde diagnose en op een moment dat de deelnemers asymptomatisch waren. De gemiddelde leeftijd van de donoren was 45 jaar. Neutraliserende GMT's in subgroepen van de donoren waren als volgt: symptomatische infecties, 90 (n = 35); asymptomatische infecties, 156 (n = 3); gehospitaliseerd, 618 (n = 1). Sera werden verkregen van Sanguine Biosciences (Sherman Oaks, CA), de MT Group (Van Nuys, CA) en Pfizer Occupational Health and Wellness (Pearl River, NY). Menselijke SARS-CoV-2-infectie/COVID-19 herstellende PBMC-monsters (n = 15) werden verzameld van donoren van 22-79 jaar oud 30-62 dagen na PCR-bevestigde diagnose wanneer donoren asymptomatisch waren. PBMC-donoren hadden asymptomatische of milde infecties (n = 13; klinische score 1 en 2) of waren opgenomen in het ziekenhuis (n = 2; klinische score 4 en 5). Bloedmonsters werden verkregen van het Universitair Ziekenhuis van Frankfurt (Duitsland).

Vero-cellen (CCL-81) en Vero E6-cellen (ATCC CRL-1586) zijn afkomstig van de American Type Culture Collection (ATCC), die een kwaliteitsbeheersysteem onderhoudt dat in overeenstemming is met ISO 9001:2015, ISO 13485:2016, ISO 17025: 2017 en ISO 17034:2016. Cellen werden gecertificeerd door de verkoper en gekweekt in Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) met GlutaMAX (Gibco) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) (Sigma-Aldrich). Cellijnen werden getest op mycoplasma-besmetting na ontvangst en vóór expansie en cryopreservatie. PBMC's werden geïsoleerd door Ficoll-Hypaque (Amersham Biosciences) dichtheidsgradiëntcentrifugatie en gecryopreserveerd vóór daaropvolgende analyse.

Een recombinant SARS-CoV-2 RBD dat een C-terminus Avitag (Acro Biosystems) bevatte, werd gebonden aan met streptavidine gecoate Luminex-microsferen. Door warmte geïnactiveerde sera van deelnemers werden verdund tot 1:500, 1:5.000 en 1:50.000. Na een nacht incubatie bij 2-8 ° C onder schudden, werden de platen gewassen in een oplossing die 0, 05% Tween-20 bevatte. Een secundair R-PE-gelabeld geit-anti-humaan IgG polyklonaal antilichaam (1:500; Jackson Labs) werd gedurende 90 min bij kamertemperatuur onder schudden toegevoegd, voordat de platen nogmaals werden gewassen in een oplossing die 0,05% Tween-20 bevatte. Gegevens werden vastgelegd als mediane fluorescentie-intensiteiten (MFI's) met behulp van een Bioplex200-systeem (Bio-Rad) en omgezet in U/ml-antilichaamconcentraties met behulp van een referentiestandaardcurve (referentiestandaard bestaande uit een pool van vijf herstellende serummonsters die meer dan 14 dagen na COVID-19 PCR-diagnose en achtereenvolgens verdund in antilichaamverarmd menselijk serum) met willekeurig toegewezen concentraties van 100 E/ml en rekening houdend met de serumverdunningsfactor. Er werden drie verdunningen gebruikt om de kans te vergroten dat ten minste één resultaat voor elk monster binnen het bruikbare bereik van de standaardcurve zou vallen. Testresultaten worden vermeld in U/ml IgG. De uiteindelijke testresultaten werden uitgedrukt als de GMC van alle monsterverdunningen die een geldig testresultaat opleverden binnen het testbereik.

De neutralisatietest gebruikte een eerder beschreven stam van SARS-CoV-2 (USA_WA1/2020) die was gered door omgekeerde genetica en gemanipuleerd door de insertie van een mNeonGreen (mNG) -gen in open leesraam 7 van het virale genoom33. Dit reportervirus genereert vergelijkbare plaquemorfologieën en niet te onderscheiden groeicurven van wildtype virus. Virale masterstocks (2 x 107 PFU / ml) werden gekweekt in Vero E6-cellen zoals eerder beschreven . Met herstellende sera van de patiënt leverde de fluorescentie-neutralisatietest vergelijkbare resultaten op als de conventionele plaque-reductie-neutralisatietest34. Seriële verdunningen van door warmte geïnactiveerde sera werden gedurende 1 uur bij 37 °C geïncubeerd met het reportervirus (2 x 104 PFU per putje om een ​​infectiepercentage van 10-30% van de Vero CCL81-monolaag op te leveren) voordat de Vero CCL81-celmonolagen (gerichte om 8.000 tot 15.000 cellen in een centraal veld van elk putje te hebben op het moment van zaaien, 24 uur vóór infectie) in platen met 96 putjes om nauwkeurige kwantificering van geïnfecteerde cellen mogelijk te maken. Het totale aantal cellen per putje werd geteld door nucleaire kleuring (Hoechst 33342) en fluorescerende viraal geïnfecteerde foci werden 16-24 uur na inoculatie gedetecteerd met een Cytation 7 Cell Imaging Multi-Mode Reader (BioTek) met Gen5 Image Prime versie 3.09. Titers werden berekend in GraphPad Prism versie 8.4.2 door het genereren van een vier-parameter (4PL) logistieke fit van het percentage neutralisatie bij elke seriële serumverdunning. De neutralisatietiter van 50% (VNT50) werd gerapporteerd als de geïnterpoleerde reciproke van de verdunning, wat een vermindering van 50% van de fluorescerende virale foci opleverde.

Vesiculair stomatitisvirus (VSV) -SARS-CoV-2-S pseudodeeltjesgeneratie en neutralisatie-assays werden uitgevoerd zoals eerder beschreven . Kortom, voor menselijke codons geoptimaliseerde SARS-CoV-2-spikes (GenBank: MN908947.3) werd gesynthetiseerd (Genscript) en gekloond in een expressieplasmide. De volledige genoomsequenties van SARS-CoV-2 werden op 20 maart 2020 gedownload van de GISAID-nucleotidedatabase (https://www.gisaid.org), zoals eerder beschreven21. Sequenties werden samengesteld en de genetische diversiteit van het spike-coderende gen werd beoordeeld over hoogwaardige genoomsequenties met behulp van aangepaste pijplijnen. Aminozuursubstituties werden gekloneerd in het spike-expressieplasmide met behulp van plaatsgerichte mutagenese. HEK293T-cellen (ATCC CRL-3216) werden geënt (kweekmedium: DMEM high glucose (Life Technologies) aangevuld met 10% door warmte geïnactiveerd FBS (Life Technologies), 90,1 eenheden/ml penicilline, 90,1 g/ml streptomycine en 0,26 mg/ml l-glutamine (Life Technologies)) en de volgende dag getransfecteerd met spike-expressieplasmide met behulp van Lipofectamine LTX (Life Technologies) volgens het protocol van de fabrikant. 24 uur na transfectie bij 37 °C werden cellen geïnfecteerd met VSVΔG:mNeon/VSV-G verdund in Opti-MEM (Life Technologies) bij een veelvoud van infectie van 1. Cellen werden gedurende 1 uur bij 37 °C geïncubeerd , gewassen om resterend invoervirus te verwijderen en bedekt met infectiemedium (DMEM hoge glucose aangevuld met 0,7% laag IgG BSA (Sigma), 1 mM natriumpyruvaat (Life Technologies) en 0,05 g/ml gentamicine (Life Technologies)). Na 24 uur bij 37 ° C werd het supernatant dat VSV-SARS-CoV-2-S pseudodeeltjes bevat verzameld, gedurende 5 minuten bij 3.000 g gecentrifugeerd om te klaren en tot verder gebruik bij -80 ° C bewaard.

Voor pseudovirusneutralisatieassays werden Vero-cellen (ATCC CCL-81) uitgezaaid in platen met 96 putjes in kweekmedium en men liet ze ongeveer 85% confluentie bereiken vóór gebruik in de test (24 uur later). Sera werden serieel 1:2 verdund in infectiemedium, beginnend met een 1:40 verdunning. VSV-SARS-CoV-2-S pseudodeeltjes werden 1: 1 verdund in infectiemedium voor een fluorescerende focuseenheid (ffu) telling in de test van ~ 1.000. Serumverdunningen werden 1:1 gemengd met pseudodeeltjes gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur vóór toevoeging aan Vero-cellen en incubatie bij 37 ° C gedurende 24 uur. Supernatanten werden verwijderd en vervangen door PBS (Gibco), en fluorescerende foci werden gekwantificeerd met behulp van de SpectraMax i3-plaatlezer met MiniMax-beeldvormingscytometer (Molecular Devices). Neutralisatietiters werden berekend in GraphPad Prism versie 8.4.2 door het genereren van een 4PL fit van het percentage neutralisatie bij elke seriële serumverdunning. De pVNT50 werd gerapporteerd als de geïnterpoleerde reciproke van de verdunning, wat een vermindering van 50% van de fluorescerende virale foci opleverde.

IFNγ ELISpot-analyse werd ex vivo uitgevoerd (zonder verder in vitro kweken voor expansie) met behulp van PBMC's zonder CD4+ en verrijkt voor CD8+ T-cellen (CD8+ effectoren), of verarmd voor CD8+ en verrijkt voor CD4+ T-cellen (CD4+ effectoren). Tests werden uitgevoerd in duplo en met een positieve controle (anti-CD3 monoklonaal antilichaam (1:1.000; Mabtech)). Multiscreen filterplaten (Merck Millipore) vooraf gecoat met IFNγ-specifieke antilichamen (ELISpotPro-kit, Mabtech) werden gewassen met PBS en geblokkeerd met X-VIVO 15-medium (Lonza) dat 2% humaan serumalbumine (CSL-Behring) bevat gedurende 1– 5 u. Per putje werden 3,3 x 105 effectorcellen gedurende 16-20 uur gestimuleerd met een overlappende peptidepool die de door het vaccin gecodeerde RBD vertegenwoordigt. Gebonden IFNγ werd zichtbaar gemaakt met behulp van een secundair anti-IFNγ-antilichaam direct geconjugeerd met alkalische fosfatase (1:250; ELISpotPro-kit, Mabtech) gevolgd door incubatie met een 5-broom-4-chloor-3′-indolylfosfaat (BCIP)/nitroblauw tetrazolium (NBT) substraat (ELISpotPro kit, Mabtech). Platen werden gescand met behulp van een AID Classic Robot ELISPOT Reader en geanalyseerd met AID ELISPOT 7.0-software (AID Autoimmun Diagnostika). Spottellingen werden samengevat als gemiddelde waarden van elk duplicaat. T-celreacties gestimuleerd door peptiden werden vergeleken met effectoren die alleen met medium waren geïncubeerd als een negatieve controle met behulp van een interne ELISpot-gegevensanalysetool (EDA), gebaseerd op twee statistische tests (distributievrije herbemonstering) zoals beschreven35,36, om gevoeligheid te bieden terwijl de controle over valse positieven behouden blijft.

Om rekening te houden met de variërende monsterkwaliteit die wordt weerspiegeld in het aantal vlekken als reactie op anti-CD3-antilichaamstimulatie, werd een normalisatiemethode toegepast om directe vergelijking van het aantal vlekken / sterkte van de respons tussen individuen mogelijk te maken. Deze afhankelijkheid werd op een log-lineaire manier gemodelleerd met een Bayesiaans model inclusief een ruiscomponent (niet gepubliceerd). Voor een robuuste normalisatie werd elke normalisatie 10.000 keer bemonsterd uit het model en werd de mediaan genomen als genormaliseerde spottellingwaarde. Waarschijnlijkheid van het model logλE = αlogλP + logβj + σε, waarbij λE het genormaliseerde aantal spots van het monster is, α een stabiele factor (normaal verdeeld) is die veel voorkomt bij alle positieve controles λP, βj een j-specifieke component van het monster is (normaal verdeeld ) en σε is de ruiscomponent, waarvan σ Cauchy-gedistribueerd is en ε Student's t-gedistribueerd. βj zorgt ervoor dat elk monster als een andere batch wordt behandeld.

Cytokine-producerende T-cellen werden geïdentificeerd door middel van intracellulaire cytokinekleuring. PBMC's die werden ontdooid en 4 uur rustten in OpTmizer-medium aangevuld met 2 g/ml DNase I (Roche) werden opnieuw gestimuleerd met een peptidepool die de door het vaccin gecodeerde SARS-CoV-2 RBD voorstelt (2 μg/ml/peptide; JPT Peptide Technologies) in aanwezigheid van GolgiPlug (BD) gedurende 18 uur bij 37 °C. Controles werden behandeld met DMSO-bevattend medium. Cellen werden gekleurd op levensvatbaarheid en oppervlaktemarkers (CD3 BV421, 1:250; CD4 BV480, 1:50; CD8 BB515, 1:100; alle BD Biosciences) in stroombuffer (DPBS (Gibco) aangevuld met 2% FBS (Biochrom) , 2 mM EDTA (EDTA; Sigma-Aldrich) gedurende 20 minuten bij 4 ° C. Daarna werden monsters gefixeerd en permeabel gemaakt met behulp van de Cytofix/Cytoperm-kit volgens de instructies van de fabrikant (BD Biosciences).buffer gedurende 30 minuten bij 4 ° C. (CD3 BV421, 1:250; CD4 BV480, 1:50; CD8 BB515, 1:100; IFNγ PE-Cy7, 1:50; IL-2 PE, 1:10; IL-4 APC, 1:500; alle BD Biosciences). Monsters werden verkregen op een door fluorescentie geactiveerde celsorteerder (FACS) VERSE-instrument (BD Biosciences) met behulp van BD FACSuite-softwareversie 1.0.6 en geanalyseerd met FlowJo-softwareversie 10.5.3 (FlowJo LLC, BD Biosciences). specifieke cytokineproductie werd gecorrigeerd voor achtergrond door aftrekking van waarden verkregen met dimethylsulfoxide (DMSO)-bevattend medium. Negatieve waarden werden op nul gezet. de productie in fig. 4b werd berekend door optellen de fracties van alle CD4+ T-cellen die positief zijn voor IFNγ, IL-2 of IL-4, waarbij deze som op 100% wordt gesteld en de fractie van elke specifieke cytokine-producerende subset daarvan wordt berekend. Pseudocolour plot-assen zijn in log10-schaal.

Menselijke PBMC's werden gedurende 48 uur opnieuw gestimuleerd met SARS-CoV-2 RBD-peptidepool (2 g/ml eindconcentratie per peptide). Stimulatie met DMSO-bevattend medium diende als negatieve controles. Concentraties van tumornecrosefactor (TNF), IL-1β, IL-12p70, IL-4 en IL-5 in supernatanten werden bepaald met behulp van een op kralen gebaseerde, 11-plex TH1/TH2 humane ProcartaPlex-immunoassay (Thermo Fisher Scientific) volgens de instructies van de fabrikant. Fluorescentie werd gemeten met een Bioplex200-systeem (Bio-Rad) en geanalyseerd met ProcartaPlex Analyst 1.0-software (Thermo Fisher Scientific). RBD-specifieke cytokineproductie werd gecorrigeerd voor achtergrond door aftrekking van waarden verkregen met DMSO-bevattend medium. Negatieve waarden werden op nul gezet.

De steekproefomvang voor het gerapporteerde deel van het onderzoek was niet gebaseerd op het testen van statistische hypothesen. Alle deelnemers met beschikbare gegevens werden opgenomen in de veiligheids- en immunogeniciteitsanalyses. De statistische aggregatiemethode die wordt gebruikt voor de analyse van antilichaamconcentraties en titers is het geometrische gemiddelde en het overeenkomstige 95%-BI. Door het geometrische gemiddelde te gebruiken, kunnen we rekening houden met niet-normale verdeling van antilichaamconcentraties en titers die verschillende ordes van grootte overspannen. Spearman-correlatie werd gebruikt om de monotone relatie tussen niet-normaal verdeelde datasets te evalueren. Alle statistische analyses zijn uitgevoerd met GraphPad Prism-softwareversie 8.4.2. De experimenten waren niet gerandomiseerd en de onderzoekers waren niet blind voor toewijzing tijdens experimenten en uitkomstbeoordeling.

Meer informatie over onderzoeksopzet is beschikbaar in de Nature Research Reporting Summary die aan dit document is gekoppeld.

De gegevens die de bevindingen van deze studie ondersteunen, zijn op redelijk verzoek verkrijgbaar bij de corresponderende auteur. SARS-CoV-2 complete genoomsequenties werden op 20 maart 2020 gedownload uit de GISAID-nucleotidedatabase (https://www.gisaid.org), zoals eerder beschreven21. Na voltooiing van deze klinische proef zullen de resultaten op samenvattingsniveau openbaar worden gemaakt en gedeeld in overeenstemming met de richtlijnen voor het delen van gegevens.

Er is een correctie op dit artikel gepubliceerd: https://doi.org/10.1038/s41586-020-03102-w

Mulligan, MJ et al. Fase 1/2-studie van COVID-19 RNA-vaccin BNT162b1 bij volwassenen. Natuur https://doi.org/10.1038/s41586-020-2639-4 (2020).

WHO. Dashboard voor coronavirusziekte (COVID-19) (toegankelijk op 17 september 2020); https://covid19.who.int/

Habibzadeh, P. & Stoneman, EK Het nieuwe coronavirus: een vogelperspectief. int. J. Bezetten. omgeving. med. 11, 65-71 (2020).

Pardi, N. et al. Nucleoside-gemodificeerde mRNA-vaccins induceren krachtige T-folliculaire helper- en kiemcentrum-B-celreacties. J. Exp. med. 215, 1571-1588 (2018).

Sahin, U., Karikó, K. & Türeci, . op mRNA gebaseerde therapieën - ontwikkeling van een nieuwe klasse geneesmiddelen. Nat. Rev. Drugsontdekking. 13, 759-780 (2014).

Pardi, N. et al. Zika-virusbescherming door een enkele lage dosis nucleoside-gemodificeerde mRNA-vaccinatie. Natuur 543, 248-251 (2017).

ADS CAS-artikel Google Scholar 

Pardi, N. et al. Karakterisering van HIV-1 nucleoside-gemodificeerde mRNA-vaccins bij konijnen en resusapen. wrat. daar. Nucleïnezuren 15, 36-47 (2019).

Sahin, U. et al. Een RNA-vaccin stimuleert de immuniteit bij met checkpointremmers behandeld melanoom. Natuur 585, 107-112 (2020).

Rauch, S., Jasny, E., Schmidt, KE & Petsch, B. Nieuwe vaccintechnologieën om uitbraaksituaties te bestrijden. Voorkant. Immunol. 9, 1963 (2018).

Pardi, N. et al. Expressiekinetiek van nucleoside-gemodificeerd mRNA dat via verschillende routes in lipidenanodeeltjes aan muizen wordt afgeleverd. J. Controle. Uitgave 217, 345-351 (2015).

Pardi, N. et al. Nucleoside-gemodificeerde mRNA-immunisatie wekt hemagglutinine-stalspecifieke antilichamen van het influenzavirus op. Nat. Gemeenschap. 9, 3361 (2018).

Tai, W. et al. Een recombinant receptorbindend domein van MERS-CoV in trimere vorm beschermt transgene muizen met dipeptidylpeptidase 4 (hDPP4) tegen MERS-CoV-infectie. Virologie 499, 375-382 (2016).

Holtkamp, ​​S. et al. Modificatie van voor antigeen coderend RNA verhoogt de stabiliteit, translationele werkzaamheid en T-celstimulerende capaciteit van dendritische cellen. Bloed 108, 4009-4017 (2006).

Orlandini von Niessen, AG et al. Verbetering van op mRNA gebaseerde therapeutische genafgifte door expressieverhogende 3'-UTR's geïdentificeerd door cellulaire bibliotheekscreening. wrat. daar. 27, 824-836 (2019).

Karikó, K. et al. Opname van pseudouridine in mRNA levert een superieure niet-immunogene vector op met verhoogde translationele capaciteit en biologische stabiliteit. wrat. daar. 16, 1833-1840 (2008).

Tsai, MIJN et al. Effect van griepvaccin op markers van ontsteking en lipidenprofiel. J.Lab. kl. med. 145, 323-327 (2005).

Taylor, DN et al. Ontwikkeling van VAX128, een recombinant hemagglutinine (HA) influenza-flagellinefusievaccin met verbeterde veiligheid en immuunrespons. Vaccin 30, 5761-5769 (2012).

Döner, F. et al. Op RNA gebaseerd adjuvans CV8102 verbetert de immunogeniciteit van een goedgekeurd rabiësvaccin in een eerste studie bij mensen. Vaccin 37, 1819-1826 (2019).

Destexhe, E. et al. Evaluatie van C-reactief proteïne als een inflammatoire biomarker bij konijnen voor niet-klinische veiligheidsstudies in vaccins. J. Pharmacol. giftig. Methoden 68, 367-373 (2013).

Kamphuis, E., Junt, T., Waibler, Z., Forster, R. & Kalinke, U. Type I interferonen reguleren direct de recirculatie van lymfocyten en veroorzaken tijdelijke bloedlymfopenie. Bloed 108, 3253-3261 (2006).

Baum, A. et al. Antilichaamcocktail tegen SARS-CoV-2 spike-eiwit voorkomt snelle mutatie-ontsnapping die wordt gezien met individuele antilichamen. Wetenschap 369, 1014-1018 (2020).

Zhang, L. et al. De D614G-mutatie in het SARS-CoV-2 spike-eiwit vermindert S1-afscheiding en verhoogt de besmettelijkheid. Preprint op https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.06.12.148726v1 (2020).

Sette, A. et al. Selectieve CD4+ T-cel helpt bij antilichaamreacties op een groot viraal pathogeen: deterministische koppeling van specificiteiten. Immuniteit 28, 847-858 (2008).

Vabret, N. et al. Immunologie van COVID-19: huidige stand van de wetenschap. Immuniteit 52, 910-941 (2020).

Sainz, B., Jr, Mossel, EC, Peters, CJ & Garry, RF Interferon-bèta en interferon-gamma remmen synergetisch de replicatie van ernstig acuut respiratoir syndroom-geassocieerd coronavirus (SARS-CoV). Virologie 329, 11-17 (2004).

Chong, WP et al. Het interferon-gamma-genpolymorfisme +874 A/T is geassocieerd met ernstig acuut respiratoir syndroom. BMC-infectie. dit. 6, 82 (2006).

Ng, O.-W. et al. Geheugen-T-celreacties gericht op het SARS-coronavirus blijven tot 11 jaar na infectie bestaan. Vaccin 34, 2008-2014 (2016).

Gallais, F. et al. Intrafamiliale blootstelling aan SARS-CoV-2 induceert een cellulaire immuunrespons zonder seroconversie. Preprint op https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.06.21.20132449v1 (2020).

Chi, X. et al. Een neutraliserend humaan antilichaam bindt aan het N-terminale domein van het Spike-eiwit van SARS-CoV-2. Wetenschap 369, 650-655 (2020).

Brouwer, PJM et al. Krachtige neutraliserende antilichamen van COVID-19-patiënten definiëren meerdere kwetsbaarheden. Wetenschap 369, 643-650 (2020).

Feldman, RA et al. mRNA-vaccins tegen H10N8- en H7N9-influenzavirussen met pandemisch potentieel zijn immunogeen en worden goed verdragen door gezonde volwassenen in gerandomiseerde klinische fase 1-onderzoeken. Vaccin 37, 3326-3334 (2019).

Walsh, EE et al. Op RNA gebaseerd COVID-19-vaccin BNT162b2 geselecteerd voor een cruciale werkzaamheidsstudie. Preprint op https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.08.17.20176651v2 (2020).

Xie, X. et al. Een infectieuze cDNA-kloon van SARS-CoV-2. Celgastheermicrobe 27, 841-848.e3 (2020).

Muruato, AE et al. Een neutraliserende antilichaamtest met hoge doorvoer voor de diagnose van COVID-19 en de evaluatie van vaccins. Nat. Gemeenschap. 11, 4059 (2020).

ADS CAS-artikel Google Scholar 

Moodie, Z., Huang, Y., Gu, L., Hural, J. & Self, SG Statistische positiviteitscriteria voor de analyse van ELISpot-assaygegevens in HIV-1-vaccinonderzoeken. J. Immunol. Methoden 315, 121-132 (2006).

Moodie, Z. et al. Criteria voor responsdefinitie voor ELISPOT-assays herzien. Kanker Immunol. Immuunander. 59, 1489-1501 (2010).

Amerikaanse ministerie van Volksgezondheid en Human Services. Toxiciteitsschaal voor gezonde volwassen en adolescente vrijwilligers die deelnamen aan preventieve klinische onderzoeken met vaccins. https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/toxic-grading-scale-healthy-adult-and-adolescent-volunteers-enrolled-preventive-vaccine-clinical (2007).

Wij danken M. Dolsten voor advies bij het opstellen van het manuscript; C. Anders, C. Anft, N. Beckmann, K. Bissinger, G. Boros, P. Cienskowski, K. Clarke, C. Ecker, A. Engelmann, Y. Feuchter, L. Heesen, M. Hossainzadeh, S. Jägle, L. Jeck, O. Kahl, M. Knezovic, T. Kotur, M. Kretschmer, O. Pfante, J. Reinholz, L.-M. Schmid, R. Schulz, B. Stock, C. Müller, S. Murphy, G. Szabó en M. Vehreschild voor technische ondersteuning, projectbeheer en advies; A. Finlayson en M. Rao voor redactionele assistentie; P. Koch en F. Groher voor gegevensbeheer en -analyse; S. Liebscher en O. Kistner voor deskundig advies; J. Absalon voor manuscriptadvies; het CRS-team (Mannheim en Berlijn) voor studiegedrag: S. Baumann, M. Berse, M. Casjens, B. Ehrlich en F. Seitz; het Pfizer Vaccines Clinical Assays Team en het Pfizer Aviation Team voor technische en logistieke ondersteuning van serologische analyses; en de GISAID Nucleotide-database voor het delen van volledige SARS-CoV-2-genoomsequenties. BioNTech is de sponsor van het onderzoek en verantwoordelijk voor het ontwerp, de gegevensverzameling, de gegevensanalyse, de gegevensinterpretatie en het schrijven van het rapport. Pfizer adviseerde over de studie en het manuscript, genereerde serologische gegevens en contracteerde voor het genereren van serologische gegevens. De corresponderende auteurs hadden volledige toegang tot alle gegevens in het onderzoek en waren eindverantwoordelijk voor de beslissing om de gegevens voor publicatie in te dienen. Alle onderzoeksgegevens waren beschikbaar voor alle auteurs. Dit onderzoek werd op het moment van indiening niet ondersteund door externe financiering.

Ugur Sahin, Alexander Muik, Evelyna Derhovanessian, Isabel Vogler, Lena M. Kranz, Mathias Vormehr, Jasmin Quandt, Daniel Maurus, Sebastian Brachtendorf, Verena Lörks, Julian Sikorski, Rolf Hilker, Dirk Becker, Ann-Kathrin Eller, Jan Grützner, Carsten Boesler, Corinna Rosenbaum, Marie-Cristine Kühnle, Ulrich Luxemburger, Alexandra Kemmer-Brück, David Langer, Stefanie Bolte, Katalin Karikó, Tania Palanche, Boris Fischer & Özlem Türeci

TRON gGmbH–Translationele oncologie aan het Universitair Medisch Centrum van de Johannes Gutenberg, Mainz, Duitsland

Regeneron Pharmaceuticals, Tarrytown, NY, VS

Alina Baum, Kristen Pascal & Christos A. Kyratsous

Bexon Clinical Consulting, Upper Montclair, NJ, VS

CRS Clinical Research Services Mannheim GmbH, Mannheim, Duitsland

Universiteit van Texas Medical Branch, Galveston, TX, VS

Pei-Yong Shi & Camila Fontes-Garfias

Pfizer, Pearl River, NY, VS

John L. Perez, Kena A. Swanson, Jakob Loschko, Ingrid L. Scully, Mark Cutler, Warren Kalina, David Cooper, Philip R. Dormitzer & Kathrin U. Jansen

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

U kunt deze auteur ook zoeken in PubMed Google Scholar

US bedacht en conceptualiseerde het werk en de strategie, ondersteund door Ö.T. Experimenten werden gepland of begeleid door ED, CF-G., CAK, LMK, UL, AM, JQ, P.-YS en IVAB, DC, MC, CF-G., WK, KP, JQ, ILS en P.- YS voerde experimenten uit. DB, S. Brachtendorf, ED, PRD, JG, KUJ, A.-KE, LMK, M.-CK, VL, AM, JQ, JS, IV en MV geanalyseerde gegevens. DM plande en begeleidde dashboards voor analyse van klinische onderzoeksgegevens. RH was verantwoordelijk voor het normaliseren en aanpassen van gegevens. CB en CR waren verantwoordelijk voor het beheer van biomarkers en R&D-programma's. KK optimaliseerde het mRNA. MB, S. Bolte, BF, AK-B., DL, TP en AS coördineerden de operationele uitvoering van de klinische proef. JLP adviseerde over de proef, en JL en KAS adviseerden over experimenten. US en Ö.T., ondersteund door MB, ED, PRD, KUJ, LMK, AM, IV en MV, interpreteerden de gegevens en schreven het manuscript. Alle auteurs steunden de recensie van het manuscript.

Alle auteurs hebben het uniforme openbaarmakingsformulier van het International Committee of Medical Journal Editors (ICMJE) ingevuld op https://www.gisaid.orgwww.icmje.org/coi_disclosure.pdf` en verklaren: VS en Ö.T. zijn directieleden en medewerkers van BioNTech SE (Mainz, Duitsland); DB, CB, S. Brachtendorf, ED, A.-KE, BF, JG, RH, M.-CK, UL, VL, DM, CR, JS en TP zijn medewerkers bij BioNTech SE; KK, LMK, IV, AM, JQ en MV zijn werknemers bij BioNTech RNA Pharmaceuticals GmbH; MB is een werknemer bij Bexon Clinical Consulting LLC. AB, CAK en KP zijn werknemers van Regeneron Pharmaceuticals Inc; KK, AM, US en Ö.T. zijn uitvinders van octrooien en octrooiaanvragen met betrekking tot RNA-technologie en COVID-19-vaccin; DB, CB, S. Bolte, ED, JG, KK, RH, AK-B., LMK, DL, UL, AM, CR, US, Ö.T., IV en MV hebben effecten van BioNTech SE; DC, MC, PRD, KUJ, WK, JL, JLP, ILS en KAS zijn werknemers bij Pfizer en hebben mogelijk effecten van Pfizer; CAK is een officier bij Regeneron Pharmaceuticals, Inc; AB, CAK en KP hebben effecten van Regeneron Pharmaceuticals, Inc; CF-G. en P.-YS ontving een vergoeding van Pfizer om de neutralisatietest uit te voeren; geen andere relaties of activiteiten die het ingeleverde werk lijken te hebben beïnvloed.

Peer review informatie Nature bedankt Barbra Richardson en de andere anonieme reviewer(s) voor hun bijdrage aan de peer review van dit werk.

Noot van de uitgever Springer Nature blijft neutraal met betrekking tot jurisdictieclaims in gepubliceerde kaarten en institutionele voorkeuren.

Deelnemers aan de studie kregen een eerste immunisatie met BNT162b1 op dag 1 (alle dosisniveaus) en een boost-immunisatie op dag 22 ± 2 (alle dosisniveaus behalve 60 g). Serum werd verkregen op dag 1 (pre-prime), 8 ± 1 (post-prime), 22 ± 2 (pre-boost), 29 ± 3 en 43 ± 4 (post-boost). PBMC's werden verkregen op dag 1 (pre-prime) en 29 ± 3 (post-boost).

Aantal deelnemers met lokale (a) of systemische ongewenste voorvallen (AE's) (b). De deelnemers werden geïmmuniseerd met BNT162b1 op dag 1 (alle dosisniveaus) en 22 (alle dosisniveaus behalve 60 µg). n = 12 proefpersonen werden per groep geïnjecteerd, vanaf dag 22 n = 11 voor de 10 g en 50 μg cohort vanwege stopzetting van patiënten vanwege niet-vaccingerelateerde redenen. Grijze arcering geeft het aantal deelnemers op elk tijdstip aan. Volgens het protocol werden AE's geregistreerd tot 7 dagen na elke immunisatie (dagen 1-7 en 22-28) om de reactogeniciteit te bepalen; voor sommige deelnemers waren 1-2 extra dagen follow-up beschikbaar. De classificatie van bijwerkingen werd uitgevoerd volgens de aanbevelingen van de Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA)37.

Deelnemers werden geïmmuniseerd met BNT162b1 op dag 1 (alle dosisniveaus) en 22 (alle dosisniveaus behalve 60 g) (n = 12 per groep, vanaf dag 22 op n = 11 voor de 10 μg en 50 μg cohort). a, Kinetiek van C-reactief proteïne (CRP) niveau. b, Kinetiek van het aantal lymfocyten. c, Kinetiek van het aantal neutrofielen. Stippellijnen geven de boven- en ondergrens van het referentiebereik aan. Voor waarden onder de ondergrens van kwantificering (LLOQ) = 0,3 werden LLOQ/2-waarden uitgezet (a).

Deelnemers werden geïmmuniseerd met BNT162b1 op dag 1 (alle dosisniveaus) en 22 (alle dosisniveaus behalve 60 g) (n = 12 per groep, vanaf dag 22 op n = 11 voor de 10 μg en 50 μg cohort). Gegevens worden uitgezet voor alle prime/boost-gevaccineerde deelnemers (cohorten 1, 10, 30 en 50 g) met gegevenspunten voor deelnemers zonder detecteerbare T-celrespons (open cirkels; a, b, d) uitgesloten van correlatieanalyse. Niet-parametrische Spearman-correlatie. a, Correlatie van RBD-specifieke IgG-responsen (as in Fig. 1) met CD4+ T-celresponsen op dag 29 (as in Fig. 3). r = 0,4829, P = 0,0014. b, Correlatie van VNT50 (as in Fig. 2a) met CD4 + T-celreacties (as in Fig. 3). r = 0,48, P = 0,0057. c, Correlatie van CD4+ met CD8+ T-celresponsen (n = 51-as in Fig. 3a) vanaf dag 29 in dosiscohorten van 1 tot 60 g. r = 0,7, P < 0,0001. d, Correlatie van VNT50 (as in figuur 2a) met CD8+ T-celreacties (as in figuur 3) op dag 29. r = 0,3299, P = 0,0652.

De poortstrategie die wordt toegepast om celsubsets te definiëren tijdens flowcytometrie-analyse, waarvan de gegevens worden getoond in Fig. 4.

Het klinische proefprotocol voor BNT162b1.

Sahin, U., Muik, A., Derhovanessian, E. et al. COVID-19-vaccin BNT162b1 wekt menselijke antilichaam- en TH1-T-celreacties op. Natuur 586, 594-599 (2020). https://doi.org/10.1038/s41586-020-2814-7

DOI: https://doi.org/10.1038/s41586-020-2814-7

Iedereen met wie u de volgende link deelt, kan deze inhoud lezen:

Sorry, er is momenteel geen deelbare link beschikbaar voor dit artikel.

Geleverd door het Springer Nature SharedIt-initiatief voor het delen van inhoud

Door een opmerking in te dienen, stem je ermee in je te houden aan onze voorwaarden en communityrichtlijnen. Als u iets beledigends vindt of dat niet voldoet aan onze voorwaarden of richtlijnen, markeer het dan als ongepast.

Natuur (Natuur) ISSN 1476-4687 (online) ISSN 0028-0836 (print)